Selene, která byla v průběhu genocidy zajata, se po více než deseti letech probouzí jako vězeň v neprodyšně uzavřené laboratoři společnosti Antigen, mocné korporace, která se snaží vyvinout vakcínu proti virům, jenž mají na svědomí existenci upírů a lykanů.

Odvržena zbývajícími klany se Selene rozhodne spojit své síly s mladým upírem Davidem (Theo James), který se k ní připojí v krvavém tažení proti Antigenu, jenž se snaží zničit ji i její dítě. Když jí na stopu přijdou také její obvyklí nepřátelé, lykani, zdá se, že je i Selene naprosto bezmocná proti nejzákeřnějšímu protivníkovi v historii série Underworld: geneticky vylepšenému superlykanovi.
Underworld: Probuzení vnáší jakožto první film této série, natáčený ve 3D, do velkolepých bojů mezi upíry a lykany ohromující nový rozměr.
V hlavní roli filmu upírské bojovnice Selene se vrací Kate Beckinsale, hvězda prvních dvou dílů série. Uvězněné Selene se podaří uprchnout ze zajetí a ocitá se ve světě, ve kterém lidé odhalili existenci upírských i lykanských klanů a rozpoutali nemilosrdnou válku s cílem obě nesmrtelné rasy zcela smazat ze světa.